中华人民共和国农业行业标准--硅酸盐细菌肥料

中華人民共和國農業行業標準　                              硅酸鹽細菌肥料
Silicate bacteria fertilizer 　　
2000-12-22發布 2001-04-01實施
中華人民共和國農業部發布

前言
　本標準在原有標準NY227-1994《微生物肥料》的基礎上，對其中的硅酸鹽細菌肥料部分進行修改。
主要修改內容如下：
—增加術語、抽樣和判定規則部分；在檢驗方法中增加允許差；
—在技術要求中刪除成品無害化指標。
本標準自實施之日起，同時代替NY227-1994中的硅酸鹽細菌肥料部分。
本標準的附錄A、附錄B、附錄C都是標準的附錄。
本標準由中華人民共和國農業部提出。
本標準起草單位：農業部微生物肥料質量監督檢驗測試中心、中國農業科學院土壤肥料研究所。
本標準主要起草人：李慧荃、吳觀以、李元芳、葛誠、沈德龍。

硅酸鹽細菌肥料
Silicate bacteria fertilizer
1 范圍

本標準規定了硅酸鹽細菌肥料的分類、技術要求、檢驗方法、檢驗規則、包裝、標識、運輸與貯存。

本標準適用于能釋放鉀、磷與灰分元素，改善作物營養條件的有益微生物發酵制成的活體微生物肥料制品。

2 引用標準

下列標準所包含的條文，通過在本標準中引用而構成為本標準的條文。本標準出版時，所示版本均有效。所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應探討使用下列標準最新版本的可能性。

GB/T 1250一1989 極限數值的表示方法和判定方法

GB/T 6543一1986 瓦愣紙箱

NY 411一2000 固氮菌肥料

NY 227一1994 微生物肥料

3 定義
本標準采用下列定義：

3.1 硅酸鹽細菌肥料在土壤中通過其生命活動，增加植物營養元素的供應量，刺激作物生長，抑制有害微生物活動，有一定的增產效果。

4 產品分類按劑型不同分為：液體菌劑、固體菌劑和顆粒菌劑。

5 技術要求
     5.1 菌種非致病菌，能在含鉀的長石粉、云母及其他礦石的無氮培養基上生長，菌體內和發酵液中存在鉀及刺激植物生長的激素物質。
     5.1.1 菌種用膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）的一個變種菌株或環狀芽孢桿菌（B. circulans）及其他經過鑒定用于硅酸鹽細菌肥料生產的菌種，嚴格控制各種遺傳工程微生物菌種（GEM）的使用。凡用本標準以外的菌種必須經過鑒定。
     5.1.2 菌體大小為4~7μm×1~1.2μm，長桿狀，兩端鈍圓，胞內常有1~2個大脂肪顆粒，革蘭氏染色呈陰性，有莢膜，有橢圓形芽孢。
     5.1.3 在無氮培養基上生長的菌落粘稠，富有彈性，呈圓形，邊緣整齊、光滑、有光澤，隆起度大，無色透明。
     5.1.4 在牛肉膏蛋白胨培養基上基本不生長。

5.2 成品技術指標(見表1)
表1 成品技術指標            項目液體固體顆粒
外觀無異臭味黑褐色或褐色粉狀，濕潤、松散，無異臭味黑色或褐色顆粒
水分，% - 25.0~50.0 ≤10.0
pH值 6.5~8.5 6.5~8.5 6.5~8.5
細度, % - 過孔徑0.18mm標準篩的篩余物≤20 孔徑5.0mm~2.5mm ≤10
有效活菌數，個/ml (個/g、個/瓶 )  ≥ 5.0×108 1.2×108 1.0×108
雜菌率1），%     ≤ 5.0 15.0 15.0
有效期2），月    ≥ 3 6 6

1）其中包括10-6馬丁培養基平板上無霉菌。 2）此項僅在監督部門或仲裁檢驗雙方認為有必要時才檢測。

6 抽樣
   按每一發酵罐菌液制成的產品為一批，逐批抽樣檢驗。抽樣過程要嚴格避免雜菌污染。
    6.1 抽樣工具及用品抽樣前預先準備好無菌塑料袋(或塑料瓶)、金屬勺、剪刀、封口機(或封口膠帶)、牛皮紙封樣袋、標簽、抽樣封條和膠水。
     6.2 抽樣數量及抽樣方法在成品庫抽樣，按“ ”形分層設點抽樣，抽樣以件為單位，小包裝產品以一包裝箱為一件。大包裝（30-50kg）產品以一袋（或一桶）為一件。抽樣基數由樣品基數的大小確定。1-10件，全部抽樣。11-200件，抽樣10件；201-400件，抽取20件。樣品基數大于400件，按照超過部分的2%增加抽樣件數。總件數不超過40件。
    每件小包裝產品抽取一小袋，在無菌條件下每袋取樣200g。將所有樣品混勻，按四分法縮到2000g，分裝4袋，然后封口。每2袋為一份裝入牛皮紙封樣袋。
    液體產品每件吸取10mL，一同防入無菌的三角瓶中，混勻后分成兩份，每份250mL。凍干產品，每件取一支防入無菌的三角瓶中，加無菌液體培養液，溶解混勻后分成兩份，每份50mL。貼上抽樣標簽和封條（一份被抽樣單位留存，一份交檢測中心檢測）。

  7 檢驗方法
    7.1 儀器設備及試劑
7.1.1 儀器設備生物顯微鏡（10×100）；
菌落計數器；
恒溫培養箱；
恒溫干燥箱；
恒溫搖床；
滅菌鍋；
無菌室或超凈工作臺；
酸度計；
試管：ф15mm×150mm，ф18mm×180mm；
培養皿：直徑9cm；
三角瓶：500mL；
無菌吸管：1、2、5、10mL；
玻璃刮刀；
濾紙；
酒精燈；
標準篩：孔徑0.18mm和0.15mm；
1號羊毛畫筆；
無菌水；
無離子水。

7.1.2 試劑(見附錄A)

7.2 成品檢驗

    7.2.1 氣味檢驗
    取硅酸鹽細菌肥料樣品打開包裝，進行感官檢驗。
     7.2.2 外觀檢驗
    將固體硅酸鹽細菌肥料包裝打開，裝在白色搪瓷盤中，將液體硅酸鹽細菌肥料搖勻，在明亮光線下進行感官檢驗。
      7.2.3 pH值測定
     液體型樣品：用50mL量筒取40mL樣品放入50mL燒杯中，直接在酸度計上測定，取三次測定結果的平均數。
     粉末型、顆粒型樣品：稱取樣品15.0g，放入50mL燒杯中，加入無離子水30mL。通過磁力攪拌使溶液均勻后用酸度計測定pH值。取三次測定結果的平均數。
     7.2.4 含水量測定
    稱取固體硅酸鹽細菌肥料三份，每份20.00g，精確到0.01g，放入已稱恒重的鋁盒中。置105℃干燥箱內烘烤4h，移至干燥器內，冷卻后稱重。
    根據烘干前后質量差按式(l)計算含水量。取三個樣品測定數的平均值。平行樣品絕對偏差應低于1%。
     含水量(%)=（m0-m1）/m0×100 ………………(1)
式中：m0一烘干前樣品質量，g
       m1一烘干后樣品質量，g。

    7.2.5 細度測定
    準確稱取粉末型樣品50.0g，放入300mL燒杯中，加250mL的自來水浸泡5min，將浸泡好的樣品倒入0.18mm的篩上，用自來水沖洗（沖洗時嚴防樣品濺出），在沖洗過程中，用刷子輕輕地刷，直至流下清水為止。將篩子連同篩上樣品放到烘箱中，在105℃下烘4h，冷卻后稱篩上樣品。
    篩上樣品百分數含量按式（2）計算，樣品通過0.18mm孔徑篩子的百分數按式（3）計算：
    篩上樣品（%）=篩余物干重/（1-樣品含水百分數）/樣品質量×100 ………………(2)
    注：篩上樣品的百分數不得大于20%。

  樣品通過0.18mm孔徑篩子的百分數=1-篩上樣品百分數…………(3)

    顆粒樣品通過篩子測量時，不須水浸泡，將孔徑5.0mm和2.5mm兩篩摞在一起，大孔徑在上，一次通過。篩上物須小于10%。

     7.2.6 有效活菌數及雜菌率的測定
    平板計數法，采用選擇培養基（見附錄B），按NY 227-1994中5.2執行。

      7.2.6.1 測定步驟準確稱取樣品10.0g，加入帶玻璃珠的100mL的無菌水中(液體菌劑取l0mL加入90mL的無菌水中)，靜置20min后在旋轉式搖床上200r/min充分振蕩30min，即成母液的菌懸液。
     系列稀釋：用無菌吸管分別吸取5mL上述母液的菌懸液加入45mL無菌水中，混勻成1：10稀釋的菌懸液，這樣依次稀釋，分別得到1：1×102，1：1×103，1：1×104，1：1×105等濃度（每個稀釋度必須更換無菌吸管）。
      加樣：用0.5mL無菌吸管分別吸取不同稀釋度菌懸液0.1mL，加至直徑為9cm的選擇培養基表面，用無菌玻璃刮刀將菌懸液均勻地涂于瓊脂表面，或取1mL不同稀釋度菌懸液加入培養皿內，與瓊脂培養基混勻，每個樣品取3個連續適宜稀釋度，每一稀釋度重復3次，同時加無菌水的空白對照。
       培養：加樣后將平板用無菌紙包好，放入28℃培養38h。
      菌落計數：根據所檢測樣品的有關技術資料，通過染色、鏡檢等技術確認有效菌的菌落形態、染色反應和個體形態后，分別統計有效菌數目和雜菌數目。當空白對照平皿出現菌落數大于4時，檢測結果無效，須重做。每個稀釋度取5~10個菌落的菌體，涂片染色（見附錄A、附錄B），顯微鏡觀察識別后，選一個適宜稀釋度（菌落在30~300個之間的平板），計算出同一稀釋度三個平皿上菌落平均數。
     有效活菌數按式（4）計算：
    有效活菌數（個/g）=菌落平均數×稀釋倍數×母液菌懸液的體積/菌劑克數或毫升數/加樣量 …………………(4)
     雜菌數是指在選擇培養基上，除有效活菌外的其他種菌的菌落數與馬丁培養基上霉菌數之和。

      7.2.6.2 霉菌數測定

     將10-2或10-3稀釋度菌液0.1mL加到馬丁培養基，操作步驟同樣品有效活菌數檢測操作。
     雜菌率(%)=雜菌數/（有效菌數+雜菌數）×100 …………………(5)

     7.2.7有效期檢驗
      在產品說明書標明的有效期到達前10d測定成品各項指標，方法同7.2.1~7.2.6。

  8 檢驗規則
     8.1 檢驗分類
        8.1.1 產品出廠檢驗產品交貨時進行的檢驗。
        8.1.2 產品型式檢驗新產品鑒定或國家質檢機構質量監督檢驗。
     8.2 檢驗項目型式檢驗的檢驗項目按5.2要求進行。出廠檢驗不檢有效期。
     8.3 判定規則

        8.3.1 合格產品: a) 檢驗結果符合5.2所規定的技術指標的產品為合格產品； b) 產品有效活菌數符合指標，雜菌率不符合指標，但小于本標準規定的兩倍時，而且在馬丁培養基平板上霉菌數小于30×10-5，其他指標有一項不符合，也可判為合格產品； c) 產品有效活菌數及雜菌率符合指標，在水分、外觀、pH值、細度等次要檢測項目中，有兩項不符合技術指標，也判為合格產品。

          8.3.2 不合格產品: a)  產品有效活菌數不符合技術指標或投入菌種沒有完全相應的檢驗出，判為不合格產品； b)   產品雜菌率超過本標準規定的兩倍，判為不合格品； c)   在10-6馬丁培養基平板上霉菌數，判為不合格產品； d)   產品水分、pH值、細度、外觀等次要檢測項目中，有3項不符合技術指標，判為不合格產品。

        8.3.4 本標準中質量指標合格判斷，采用GB/T 1250中修約值比較。

9 包裝、標識、運輸和貯存

    9.1 包裝
      9.1.1 內包裝液體肥料小包裝用塑料瓶或玻璃瓶，大包裝用塑料桶。固體肥料用不透明聚乙烯塑料袋包裝。凍干菌劑用玻璃指形管真空干燥。
       9.1.2 外包裝
     外包裝采用紙箱，紙箱質量應符合GB/T 6543要求。箱外用尼龍打包帶加固。
        9.1.3 每箱(袋)產品中附有產品合格證和使用說明書，在使用說明中標明使用方法、用量及注意事項。

     9.2 標識、運輸和貯存
  硅酸鹽細菌肥料的標識、運輸和貯存按NY 411-2000中的9.2、9.3和9.4執行。

　  附錄（略）

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