固氮菌肥料行业标准

標準類別：NY-行業標準（農業）

　　關鍵詞：固氮菌肥料

　　標準號：NY411—2000

　　標準名稱：固氮菌肥料*

　　標準分類：農業土壤化肥標準

　　頒布部門：

　　頒布日期：

　　實施日期：

　　========================================================

　　1范圍

　　本標準規定了固氮菌肥料產品的分類、技術要求、檢驗方法、檢驗規則、包裝、標識、運輸、貯存等。

　　本標準適用于含有益的固氮菌、能在土壤和多種作物根際中固定空氣中的氮氣，供作物氮素營養，又能分泌激素刺激作物生長的活體制品。本標準也適用于以固氮菌為主的含有能促進固氮、生長的植物促生根際細菌（PGPR）的復合固氮菌肥料。

　　2引用標準

　　下列標準所包含的條文，通過在本標準中引用而構成為本標準的條文。本標準出版時，所示版本均為有效。所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應探討使用下列標準最新版本的可能性。

　　GB/T625—1989化學試劑硫酸

　　GB/T629—1997化學試劑氫氧化鈉

　　GB/T1250—1989極限數值的表示方法和判定方法

　　GB/T6543—1986瓦楞紙箱

　　GB/T6682—1992分析實驗室用水規格和試驗方法

　　3定義

　　本標準采用下列定義。

　　31自生固氮菌

　　在土壤里能固定空氣中的氮，供作物氮素營養，又能分泌激素刺激作物生長的微生物。

　　32根際聯合固氮菌

　　既依賴根際環境生長，又在根際中固定空氣中的氮氣，對作物的生長發育產生積極作用的微生物。

　　33固氮效能

　　固氮菌每消耗1g碳水化合物（糖）從空氣中攝取氮素的毫克數，固氮效能用mg氮/g糖表示。

　　4產品分類

　　41按劑型不同分為液體固氮菌肥料、固體固氮菌肥料和凍干固氮菌肥料。

　　42按菌種及特性分為自生固氮菌肥料、根際聯合固氮菌肥料、復合固氮菌肥料。

　　5技術要求

　　51菌種

　　在含一種有機碳源的無氮培養基中能固定分子氮，并具有一定的固氮效能。菌體一般為短桿狀（固氮螺菌屬菌體呈螺旋狀），革蘭氏染色陰性。

　　511自生固氮菌

　　用固氮菌屬（Azotobacter）、氮單胞菌屬（Azomonas）的菌種，也可用莖瘤根瘤菌（Azorhizobiumcaulinodans）和固氮芽胞桿菌（Paenibacillusazotofixans）菌株。

　　512根際聯合固氮菌

　　可用下列菌種固氮螺旋菌（Azospirillum）；陰溝腸桿菌（Enterobactercloacae）經鑒定為非致病菌的菌株；糞產堿菌（Alcaligenesfaecalis）經鑒定為非致病菌的菌株；肺炎克氏桿菌（Klebsiellapneumoniae）經鑒定為非致病菌的菌株。

　　使用本準則規定之外的菌種生產固氮菌肥料時，菌種必須經過鑒定，并符合51要求。

　　生產固氮微生物肥料所使用的菌種，必要時還要進行菌種染色鑒別（見附錄B）和菌種固氮效能測定（見附錄C）。

　　52成品技術指標（見表1）

　　表1成品技術指標

　　指標劑型：液體固體凍干

　　項目：乳白或淡褐色液體，黑褐色或褐色粉狀，

　　外觀、氣味混濁，稍有沉淀，無濕潤、松散，無異臭乳白色結晶，無味

　　異臭味味

　　水分，%—250!35030

　　pH值55!7060!7560!75

　　細度，過孔徑018mm標準篩5200

　　的篩余物，%#

　　有效活菌數，個/mL（個/g、個/501081010850108瓶）$

　　雜菌率1），%$5015020

　　有效期，2），月#3612

　　1）其中包括10-6馬丁培養基平板上無霉菌。

　　2）此項僅在監督部門或仲裁檢驗雙方認為有必要時才檢測。

　　6抽樣

　　按每一發酵罐菌液制成的產品為一批，逐批抽樣檢驗。抽樣過程要嚴格避免雜菌污染。

　　61抽樣工具及用品

　　抽樣前預先準備好無菌塑料袋（或塑料瓶）、金屬勺、剪刀、封口機、牛皮紙封樣袋、標簽、抽樣封條和膠水。

　　62抽樣數量及抽樣方法

　　在成品庫抽樣，可按''形分層設點抽取，抽樣以件為單位，小包裝產品以一包裝箱為一件。大包裝（30!50kg）產品以一袋（或一桶）為一件。抽樣件數由樣品基數的大小確定。1!10件，全部抽樣；11!200件，抽樣10件；201!400件，抽取20件；樣品基數大于

　　400件者，按超過部分的2%增加抽樣件數，但總件數不要超過40件。

　　每件包裝產品抽取一小袋，在無菌條件下每袋取樣200g。然后將所有樣品混勻，按四分法縮到2000g，分裝4袋，然后封口。每2袋為一份裝入牛皮紙封樣袋。

　　液體產品每件吸取10mL，一同放入無菌的三角瓶中，混勻后分成兩份，每份250mL。凍干產品，每件取一支放入無菌的三角瓶中，加無菌液體培養液，溶解混勻后分成兩份，每

　　份50mL。貼上標簽和封條（一份被抽樣單位留存，一份交檢測中心檢測）。

　　7檢驗方法

　　71儀器設備及試劑

　　711儀器設備

　　生物顯微鏡（10100）；菌落計數器；恒溫培養箱；恒溫干燥箱，恒溫搖床；滅菌鍋；無菌室或超凈工作臺；酸度計；試管%15mm150mm，%18mm180mm；培養皿直徑9cm；　三角瓶500mL；無菌吸管05、1、5、10mL；玻璃刮刀；濾紙；酒精燈；標準篩孔徑018mm和015mm；1號羊毛畫筆；無菌水；無離子水。712試劑選擇培養基（見附錄A）；剛果紅染液（05%）。

　　72成品檢驗

　　721氣味檢驗

　　取固氮菌肥料樣品打開包裝，進行感觀檢驗。

　　722外觀檢驗

　　將固體固氮菌肥料包裝打開，裝在白色搪瓷盤中，將液體固氮菌肥料搖勻，在明亮光線下進行感觀檢驗。

　　723pH值測定

　　液體固氮菌肥料的pH值測定：取供檢菌液直接測定pH值，取三次測定結果的平均數。固體固氮菌肥料的pH值測定：取50mL燒杯一個，加入菌肥25g，無離子水25mL。通過磁力攪拌器使溶液均勻后用酸度計測定pH值。取三次測定結果的平均數。

　　724含水量測定

　　稱取固體固氮菌肥三份，每份2000g，精確到001g，放入已稱恒重的鋁盒中。置105干燥箱內烘烤4h，移至干燥器內，冷卻后稱重。根據烘干前后質量差按式（1）計算含水量。取三個樣品測定數的平均值。平行樣品絕對偏差應低于1%。

含水量（m

　　%）=0-m1

　　m100…………………………（1）

　　0

　　式中m0———烘干前樣品質量，g；

　　m1———烘干后樣品質量，g。

　　725吸附劑顆粒細度測定

　　稱樣1000g

　　（精確至001g），置于標準篩中（直徑分別為018mm或015mm），用水沖洗，用毛筆輕刷，至粉末不再通過為止。將篩余物置105!110溫度下烘干，稱重。篩余物百分含量按式（2）計算：

　　篩余物（%）=篩余物量（1-樣品含水量百分數）

　　樣品質量100…………（2）

　　726有效活菌數和雜菌含量測定

　　采用平板計數法測定有效活菌數及雜菌率。

　　7261測定步驟

　　采樣應不少于500g，從中稱取1000g，加入帶玻璃珠的100mL的無菌水中（液體菌劑取10mL，加入90mL的無菌水中），靜置20min后在旋轉式搖床上200r/min充分振蕩

　　30min，即成母液的菌懸液。

　　用無菌吸管吸取5mL上述母液的菌懸液加入45mL無菌水中，混勻成110稀釋的菌懸液，這樣依次稀釋，分別得到11102，11103，11104，11105等濃度（每個稀釋度必須更換無菌吸管）。

　　用05mL無菌吸管分別吸取不同稀釋度菌懸液01mL，加至直徑為9cm平皿的選擇培養基（見附錄A）表面，用無菌玻璃刮刀將菌懸液均勻地涂于瓊脂表面，或取1mL不同稀釋度菌懸液加入培養皿內，與瓊脂培養基混勻，每個樣品取3個連續適宜稀釋度，每一稀釋度重復3次，同時加無菌水的空白對照。28培養2!3d后每個稀釋度取5!10個菌落的菌體，涂片染色（見附錄B）。顯微鏡觀察識別后，選一個適宜稀釋度（菌落在30!300個之間的平板），計算出同一稀釋度三個平皿上菌落平均數。

　　雜菌數是指在選擇培養基上，除有效活菌外的其他菌的菌落數與馬丁培養基上霉菌數之和。馬丁培養基10-4稀釋度菌懸液加樣，操作步驟同樣品有效活菌數檢測操作。

　　7262允許差

　　平行樣品誤差按式（3）計算，并應符合表2的規定。

　　*=%（x--x）

　　(n-1…………………………………（3）

　　式中*———單一標準差；

　　x———同一個稀釋度任一個平板測定值；

　　-x———同一個稀釋度平板測定的平均值；

　　n———重復次數。

　　表2平板上菌落數對應的單—標準差

　　平板上菌落數，個/皿30!5051!99100!300

　　單一標準差，100200500

　　7263測定結果的計算

　　按式（4）、式（5）計算樣品的有效活菌數及雜菌率

　　有效活菌數（個/g）=菌落平均數稀釋倍數母液菌懸液的體積（mL）

　　菌劑克數或毫升數

　　1

　　加樣量（mL）……………………………………………………………………………（4）

　　雜菌率（%）=雜菌數

　　有效菌數+雜菌數100……………………（5）

　　727有效期檢驗在產品說明書標明的有效期到達前10d測定擾品各項指標，方法同721!726。

　　8檢驗規則

　　81檢驗分類

　　811產品出廠檢驗

　　產品交貨時進行的檢驗。

　　812產品型式檢驗

　　新產品鑒定或

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